Alltech2000型蒸发光散射检测器解决HPLC检测难题

发布于:2021-09-21 17:19:16

GRACE
ELSD检测器的选择和主要的应用介绍
格雷斯公司探索科技

GRACE
~ Davison 从分析到制备的解决方案
?美国奥泰公司(Alltech)于2004年8月并入Grace公司,隶属于三大 分支之一的Davison旗下的探索科技部门。 ?Davison是全球最大的硅胶生产商,能够为LC,GC和LC的应用提供 从小规模研发到大规模工业生产的一站式解决方案。
HPLC和GC柱,配件和仪器 硅胶基色谱填料
HPLC毛细柱和微径柱 HPLC柱和小型仪器
制备级和工业级LC柱和装柱服务 生物分离专用HPLC柱和填料

大纲

GRACE

?常规检测器的回顾 ?ELSD的检测原理 ?ELSD与常规检测器的比较 ?ELSD在分析上的优点 ?Alltech ELSD的介绍 ?ELSD的维护 ?质量保证 ?总结

其它检测器的介绍

GRACE

检测器是高效液相色谱(HPLC)的核心部件之一,被喻为HPLC的眼睛 。它的作用是将色谱柱流出物中样品含量的变化转换为可供观测的信 号,通常是转换为电信号,以便自动记录下来进行定性定量分析。

- 紫外可见UV/Vis - 示差折光RI - 荧光Fluorescence - 质谱Mass Spectrometry

检测器的应用分布
质谱4% 其它3% 荧光8% 电化学10%
示差和蒸发光10%

GRACE 紫外可见 65%

紫外/可见检测器UV/VIS

GRACE

优点: ? 易于操作 ? 可靠性 ? 费用相对低廉 ? 溶剂梯度兼容 ? 对样品没有破坏性 ? 相对灵敏度高

局限性:
? 没有好的发光基团 的化合物响应较差
? 溶剂的使用上受紫 外截止波长的限制

荧光检测器Fluorescence

GRACE

优点:
?很好的灵敏度 ?很好的选择性 ?受流速和温度的变 化影响很小

局限性:
?线性范围窄
?操作复杂-需要对化合物和 仪器的变化了解透彻
?某些物质如氧气会熄灭荧光 -必须严格脱气
?能够自然产生荧光的化合物 不是很多
?衍生方法复杂

示差折光检测器RI

GRACE

优点:
?通用性-对几乎 所有的物质具有 相应
?宽的动态线性范 围--104
?易于操作

局限性: ?检测灵敏度不高 ?对于温度和压力的波动敏 感 ?*衡慢 ?检测既有正峰也有负峰 ?不能进行梯度洗脱 ?流动相预先混合后的效果 好于泵在线混合的

质谱 MS

GRACE

优点: ?灵敏度高 ?选择性好 ?提供化学结构信息

局限性: ?购买费用高 ?操作复杂 ?需要经常维护 ?定量分析困难

蒸发光散射检测器ELSD

GRACE

?发展历史 ?检测原理 ?局限性 ?优点 ?在分析中的应用

发展历史:

GRACE

? 第一台商业化的产品出现在80年代初期 ? 最早的应用集中在聚合物的分析上 ? 90年代初期,更多其它方面的应用 ? 目前,应用在广泛的领域

ELSD行业超过20年的领先制造经验: GRACE

500 型

2000 型

800 型

2000ES型

3300 型

独特的检测方法:

GRACE

ELSD可以对所有挥发性低于流动相的物质作出 准确检测,而与被检测物质的化学基团关系不大 ,物理性质类似的物质响应一致,响应值与样品 的质量成正比。

检测三部曲: ?雾化 ?溶剂的蒸发 ?检测

GRACE
第一步:雾化
?色谱柱流出物通过 喷雾器针孔 ?与氮气混合 ?形成均匀的雾状液 滴(气溶胶)

GRACE
第二步:溶剂的蒸发
?液滴通过加热的漂移管 ?流动相蒸发 ?干燥的样品颗粒保留

第三步:检测
?样品颗粒通过流动池 ?激光“撞击”颗粒被散射 ?光电二极管检测散射光
检测角度为90℃,避免虚假 信号(>90℃折射/衍射光;<90℃反射光)

GRACE

两种类型气溶胶处理方式:

GRACE

A型-所有液滴进入漂移管及流动池(又称为 “无气溶胶分流 No Aerosol Splitting”)
B型-部分液滴分流排掉;只有一部分进入 漂移管及流动池(“气溶胶分流Aerosol Splitting”)

GRACE
A型ELSD-气溶胶不分流操作
?所有样品从喷雾器 进入漂移管及流动池 ?需要较高温度才能 完全蒸发流动相; ?A型ELSD只有不分流 一种操作模式

GRACE
B型ELSD-气溶胶分流操作
?部分样品被排掉 ?较低的温度已足 够蒸发所有溶剂 ? B型ELSD只有分流 一种操作模式

GRACE
Alltech 2000(ES)型ELSD
唯一提供两种操作模式的ELSD,在任何流动 相及样品分析条件下均达到最佳结果

GRACE
一台仪器,两种操作模式:
?撞击器(Impactor)关-所有液滴进入漂移管及流 动池(A型ELSD-无分流)
?撞击器(Impactor)开-部分液滴被排除,只有一 部分进入漂移管及流动池(B型ELSD-气溶胶分流)
?采用新型专利“气溶胶分流技术” US Patent #6229605

撞击器关模式

GRACE

?撞击器与气溶胶流向*行 ?所有样品流过漂移管到达流通池 ?最适用于非挥发性样品及D挥rive发Sha性ft 溶剂(大部分为有机)

Drive Shaft Nebulizer

Impactor ‘Off’

Nebulizer

Optics Optics

Drift Tube

Impactor ‘Off’

Nebulizer

Exhaust
Impactor Drain

撞击器开模式

GRACE

?撞击器垂直于气溶胶流向,部分液滴碰上撞击器从废 液管排掉;其余穿过撞击器,经过漂移管到达流动池
Drive Shaft

?最适用于半挥发性样品及低挥发性溶剂(大部分为水 溶液)

Drive Shaft

Impactor ‘On’
NebOulpizteicrs Optics

Exhaust

Impactor ‘On’ Nebulizer

Drift Tube Nebulizer

Impactor Drain

GRACE

撞击器关-最适合非挥发性样品

# 9206

Impactor ‘On’

碳水化合物

# 9205

Column:
Mobile Phase: Flowrate:

Alltech 700CH Carbohydrate Column 10?m, 300x6.5mm 100% Water 0.5mL/min

Impactor ‘Off’

1. 蜜三糖 (50?g/mL) 2. 乳糖(50?g/mL) 3. 葡萄糖 (50?g/mL) 4. 甘露糖 (50?g/mL)

Column:
Mobile Phase: Flowrate:

Alltech 700CH Carbohydrate Column 10?m, 300x6.5mm 100% Water 0.5mL/min

非挥发性样品在撞击器“关”的情况下也不挥发,全部进入流动池, 得到最高灵敏度

GRACE
撞击器关-最适合挥发性溶剂

# 9180 # 9179

葡萄糖苷分析

Impactor ‘On’

Column:
Mobile Phase: Flowrate:

Alltech Econosphere?, C18, 5?m, 150 x 4.6 mm Methanol:Water (90:10) 0.8mL/min

1. n-癸基-b-D-吡喃糖苷 (5?g/mL) 2. n-辛基-b-D-吡喃糖苷 (5?g/mL) 3. n-十二烷基-b-D-吡喃糖苷(5?g/mL)

Impactor ‘Off’ Column:
Mobile Phase: Flowrate:

Alltech Econosphere?, C18, 5?m, 150 x 4.6 mm Methanol:Water (90:10) 0.8mL/min

有机溶剂在较低温度蒸发,在撞击器“关”的情况下,也会完全蒸 发,B型ELSD 任何条件下均分流,造成样品损失,降低检测灵敏度

GRACE
撞击器开-最适*牖臃⑿匝

# 9201

Impactor ‘On’

防腐剂分析

Column:
Mobile Phase: Flowrate:

Alltech Econosphere?, C18, 5?m, 150 x 4.6 mm Methanol:Water (90:10) 0.8mL/min

# 9202

Impactor ‘Off’

1. 羟基苯甲酸甲酯 2. 羟基苯甲酸乙酯 3. 羟基苯甲酸丙酯 4. 羟基苯甲酸丁酯

Column:
Mobile Phase: Flowrate:

Alltech Econosphere?, C18, 5?m, 150 x 4.6 mm Methanol:Water (90:10) 0.8mL/min

在撞击器开情况下,可以较低温蒸发溶剂,防止半挥发性样 品蒸发

GRACE
撞击器开-在几乎室温下检测半挥发样品
1. Glycerol甘油
Column: Prevail? Carbohydrate ES, 5?m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: Acetonitrile: 0.04% Ammonium Hydroxide (80:20) Flowrate: 1.0mL/min

ELSD的局限性

GRACE

1. 只能使用挥发性的流动相 2. 样品的挥发性必须要小于流动相 3. 检测器响应是非线性的

挥发性的流动相改性剂#1

GRACE

Volatile Mobile Phase Modifiers

Acids Trifluoroacetic Acid三氟乙酸 Formic Acid甲酸

pKa
0.3 3.75

Acetic Acid醋酸 Carbonic Acid碳酸 Bases Ammonia氨水 Methylamine甲胺 Ethylamine二乙胺 Triethylamine三乙胺 Buffers

4.75 6.37
9.25 10.81 10.66 11.01

pKb
13.70 10.25 9.25 7.63
4.75 3.19 3.34 2.99

Ammonium Formate甲酸胺 Pyridinium Formate甲酸吡啶翁

Ammonium Acetate乙酸胺 Pyridinium Acetate乙酸吡啶翁
Ammonium Carbonate (for reverse phase) 碳酸胺(用于反相) Ammonium Carbonate碳酸胺

pH Range
3.0-5.0 3.0-5.0 3.8-5.8 4.0-6.0 8.0 (adjusted) 5.5-7.5 and 9.3-11.3

BP

MP

72.4°C 100.7°C 116.0°C


-33.35°C 16.6°C -6.3°C 89.3°C

120° C

111° C

挥发性的流动相改性剂#2

GRACE

Volatile Mobile Phase Modifiers

pKa

pKb

Ion-Pair Reagents

Pentafluoropropionic Acid五氟丙酸

~0.6

Heptafluorobutyric Acid七氟丁酸 Nonafluoropentanoic Acid九氟戊酸 Pentadecafluoroocatanoic Acid十五氟辛酸

~0.6 ~0.6

Tridecafluoroheptanoic Acid十三氟庚酸

~0.6

pH Range

BP

MP

96-97°C
120°C 140°C 189°C
175°C

*魉儆肫乒芪露

GRACE

*魉俸推乒芪露仁荅LSD中可以调节的两个 重要参数,建立适当的HPLC-ELSD分析方法需要 对这两个参数进行优化。
优化的原则是降低噪声到可以接受的程度,并尽 量提高信噪比。

*魉儆肫乒芪露

GRACE

漂移管温度对基线水*和噪音的影响并无明显的 规律性。低于某一温度,基线水*较高,因为低 于这一温度,流动相得不到充分挥发,而盐的加 入将会提高这一温度,因为盐的挥发需要更高的 温度,但并不是漂移管温度越高越好,因为温度 太高会使流动相沸腾,反而会增加背景噪音,同 时还有可能导致溶质的部分挥发,降低信噪比。
故最优温度应为在流动相(包括其中所含的盐) 基本挥发的基础上,产生可接受噪音的最低温度

*魉儆肫乒芪露

GRACE

一般来说,在其它条件不变的情况下,*魉僭 小,形成的物质粒子半径越大,对激光的散射能力 越强,相应的响应信号越大。但并不是*魉僭 小越好,因为当*魉偬∈保鞫嗖荒芡耆 挥发,背景噪音会增加,信噪比也会降低。

最优*魉儆κ窃诳山邮茉胍舻幕∩希 大检测响应值时的最低流速。

如何应对非线性响应的检测器?

GRACE

散射光的响应值与粒子质量的关系: I=kmb
取对数: lgI=blgm+lgk m:待测组分的粒子质量和 I: 待测组分所产生的散射光光强 k,b:常数
-选择2阶方程或者幂指曲线方程 -使用曲线的仅仅线性部分 -使用log/log 双对数方法产生线性曲线 即:对照品的浓度和面积同时取对数,至少两个点得到直 线方程 在中国药典2005版中,中药计算采用两点双对 数方法, 抗生素计算采用三点双对数方法

Log-Log线性方程

GRACE

Aea counts (mV ) Log Area Counts

Calibration Curves of Mono and Di- Glycerides

Calibration Log Curves of Mono- and Di-Glycerdes
3.5

1800.0 3
1600.0

1400.0

2.5

1200.0 2
1000.0
1.5 800.0

600.0

1

400.0 0.5
200.0

0.0

0

0

0.005

0.01

0.015

0.02

0.025 -3 -2.8 -2.6 -2.4 -2.2 -2 -1.8 -1.6 -1.4 -1.2 -1

Concentration (%)

Log Concentration (%)

1-L 1-O 1-S 1,3-LL Poly. (1-L) Poly. (1-O) Poly. (1-S) Poly. (1,3-LL)

1-L 1-O 1-S 1,3-LL Linear (1-L) Linear (1-O) Linear (1-S) Linear (1,3-LL)

GRACE
ELSD--功能强大的HPLC检测器
?通用性高-可检测任何挥发性低于流动相 的化合物 ?灵敏度好-比示差及低波长紫外灵敏 ?一致的响应-给出准确的样品浓度 ?用途广泛-梯度相容,改善分离及缩短分 析时间

ELSD响应因子的一致性

GRACE

?不同的物质在蒸发光散射检测器中几乎具 有相同的响应因子,这种响应因子的一致性 ,使纯度分析结果和多组分物质的相对比例 测定结果更准确。
?在无合适对照品的情况下,采用另外一种 含量已知的物质作内标,测定未知物含量成 为可能。这一点对组合分子库、无紫外发色 团物质的新药基准品的建立尤为有用。

ELSD比较其它几种检测器的优势

GRACE

?示差 RI ?紫外可见 UV/Vis ?荧光Fluorescence ?质谱MS

ELSD相比示差的优势:

GRACE

示差检测器的限制

ELSD优点

?温度变化会引起基线不稳定 ?可能出现负峰 ?不可以用梯度洗脱 ?受溶剂峰干扰
?灵敏度差

?不受环境温度影响 ?均是正峰 ?梯度洗脱兼容 ?溶剂无响应,无溶剂峰
?ng级的检测限

ELSD不会出负峰
五糖, 1.5mg/mL

GRACE
? Hypersil SI, 5um, 250 x 4.6mm ? Hexane:Ethylacetate:Ethanol (45:45:10) ? 1.0 mL/min. ? Drift Tube 75C ? Gas Flowrate 2.0 SLPM

ELSD

RI

RI

(反转极性)

GRACE

ELSD相对RI,提高了检测灵敏度和基线稳定性

1. Fructose 果糖 2. Glucose 葡萄糖 3. Sucrose 蔗糖

10278 10277

RI ELSD

Column:

Prevail? Carbohydrate ES, 5?m, 53 x 7mm (Part No. 35104)

Mobile Phase: Acetonitrile:Water (75:25)

Flowrate:

2.0mL/min

Column Temp: 30°C

碳水化合物的梯度洗脱

# 7576 (Isocratic)

Carbohydrates
1. 果糖 2. 葡萄糖 3. 蔗糖 4. 麦芽糖 5. 乳糖

# 7570 (Gradient)

1. 核糖 2. 木糖 3. 果糖 4. 葡萄糖 5. 蔗糖 6. 麦芽糖 7. 乳糖 8. 棉子糖

GRACE

ELSD相比紫外检测器的优势:

GRACE

UV的局限性
?只能检测吸收紫外或可见光 的化合物 ?检测基于样品的消光系数 ?低波长紫外检测作梯度洗脱时 出现基线漂移 ?溶剂峰会干扰 ? 溶剂选择受其紫外末端吸收限制

ELSD的优点 ? 检测挥发性低于溶剂的任
何化合物 ? 检测基于样品浓度 ?梯度洗脱时基线稳定
? 溶剂没有响应,无溶剂峰 ?可用任何挥发性的溶剂

甾体化合物
# 7940 # 7941

GRACE

1. 雌酮-3-硫酸钠, 100ng 2. b-雌二醇-17- b -D-葡萄糖苷酸钠, 100ng 3. 5b -孕烷-3a,20a-二醇-葡萄糖酸苷, 220ng

Column: Alltima? C18, 5?m, 150 x 2.1mm

(Part No. 88370)

Mobile Phase:

A: 0.1% TFA in Water

B: 0.1% TFA in Methanol

Gradient: Time:

0

10

18

%B:

60

100

100

Flow Rate: 0.2mL/min

ELSD显示在UV谱图中未检测到的成分

GRACE

Lotrimim? AF Topical Solution
1. PEG 2. Clotrimazole

#10446 #10447

10446

Column: Alltima? C18, 5?m, 150 x 4.6mm (Part No. 88302)

Mobile Phase:

A: Water B: Methanol

Gradient: Time:

0

8

10

20

25

%B:

30

50

100

100

30

Flow Rate: 1.0mL/min

Column Temp.:

40°C

GRACE

ELSD比UV更能准确反映样品实际的量

1:1 混合物

10450

1. Ephedrine 麻黄素 2. Caffeine 咖啡因

10449

Column: Alltima? HP EPS C18, 5?m, 150 x 4.6mm (Part No. 87715)

Mobile Phase:

1% Acetic Acid:Methanol:Acetonitrile (70:20:10)

Flow Rate:

1.0mL/min

GRACE

ELSD检测没有发光团的化合物不需要衍生
脂肪酸

1. lauric Acid 2. Myristic Acid 3. Palmitic Acid 4. Stearic Acid 5. Arachidic Acid 6. Behenic Acid

9539

Column: Mobile Phase: Flow Rate:

Prevail? Organic Acid, 5?m, 150 x 4.6mm (Part No. 88640) (75:25) Acetonitrile:Methanol 1.0mL/min

GRACE
ELSD在分离使用的溶剂选择上有特点
Triglycerides in Evening Primose Oil
月见草油中的甘油三酯
10047

1. LGG 2. LGL 3. LLL 4. OGL 5. PGL 6. OLL 7. OGO + PLL 8. OOO

Column: Alltima? C18, 5?m, 250 x 4.6mm (Part No. 88056)

Mobile Phase: A: Acetonitrile B: Dichloromethane

Gradient: Time: %B:
Flow Rate:

0

40

30

50

1.0mL/min

二氯甲烷对于高分子量的甘 油三酯溶解度高.

荧光检测器的局限性

GRACE

荧光检测器的限制
?大多需要柱前或柱後衍生

ELSD的优点
?无需衍生

柱前衍生法分析氨基酸—紫外&荧光

GRACE

#5164 #7596

1. 天门冬氨酸 2. 谷氨酸 3. 丝氨酸 4. 甘氨酸 5. 组氨酸 6. 苏氨酸 7. 丙氨酸 8. 精氨酸 9. 脯氨酸 10. 酪氨酸 11. 蛋氨酸 12. 缬氨酸 13. 半胱氨酸 14. 异亮氨酸 15. 亮氨酸 16. 苯丙氨酸 17. 赖氨酸

Column:

Econosphere?C8, 5?m, 250 x 4.6mm

Flowrate: 2.0mL/min

Mobile Phase: A: 50mM Ammonium Acetate, pH 6.8

B: 100mM Ammonium Acetate, pH 6.8: Methanol(20/80)

Gradient:

Time : 12 30 37

%B : 20 30 60

Detector:

UV at 254nm

Column:

Alltima?C8, 5?m, 100 x 4.6mm

Flowrate:

2.0mL/min

Mobile Phase: A: 50mM Sodium Acetate Buffer, pH 5.7, 5% THF

B: Methanol

Gradient:

Time: 0 15 20

%B: 10 65 10

Detector:

Fluorescence

ELSD对无衍生氨基酸分析

GRACE

1. Gly 2. Ser/Asn 3. Asp 4. Gln 5. Ala/Thr 6. Glu 7. Cys/Lys 8. His 9. Pro

10. Arg 11. Val 12. Met 13. Tyr 14. Ile 15. Leu 16. Phe 17. Trp

Column: Prevail? C18, 5?m, 250 x 4.6mm (Part No. 99210)

Mobile Phase: A: 5mM Heptafluorobutyric Acid, pH1.0 w/0.7% TFA B: Acetonitrile

Gradient: Time:

0

6

8

25

%B:

0

0

15

35

Flow Rate: 1.0mL/min

GRACE
虽然MS是通用性的检测器,ELSD也有自己的优势
1. 投入和操作的成本低 2. 操作容易 3. 维护简单 4. 定量相比更准确
对于色谱条件的要求在ELSD和MS上是相似的,所以 ELSD方法能够方便的应用在MS上不需要修改。
在ELSD上进行MS的方法研究,能够节省MS用于实际 样品的分析

GRACE 并联使用UV/ELSD/MS能够得到最多的结构和浓度信息

1. Aspartame 2. Hydrocortisone 3. Reserpine 4. Terfenadine

Chrom #10456 #10458 #10457

Column: ZORBAX? StableBond C18, 3.5?m, 50 x 4.6mm

(Part No. 835975-902)

Mobile Phase: A: 0.025% Formic Acid in Water

B: 0.025% Formic Acid in Acetonitrile

Gradient: Time:

0

1

5

5.1

%B:

25

0

0

25

Flow Rate: 1.0mL/min

Column Temp: 30°C

GRACE
总结:用ELSD替代或补充现有检测器的益处
?消除衍生简化方法 ?比RI有更好的灵敏度和稳定性 ?给其它检测器作补充,能够看到哪些物质没有 检测到 ?能够比UV&MS得到更准确的样品量的信息

ELSD更多的优点:
通用性的检测器: - 可以使用微径柱来提高灵敏度 - 条件方便放大到制备 - 在极端的梯度条件下进行快速分离 检测没有发光团的化合物的理想选择: - Lipids磷脂 - Polymers聚合物 - Surfactants表面活性剂 - Carbohydrates碳水化合物

GRACE

在ELSD上用微径柱检测
1. Vitamin A (100ng on-column) 2. Vitamin E (160ng on-column) 3. Vitamin K1 (130ng on-column)

GRACE
#10279

Column: Alltima? C18, 3?m, 150 x 1mm (Part No. 88384) Mobile Phase: Methanol:Chloroform (90:10) Flow Rate: 50?L/min

GRACE 制备时通过ELSD控制馏分收集器,过滤UV无吸收化合物
#10438
1. Ethinamate (5.0mg/mL)

Column: Alltima? C18, 5?m, 150 x 10mm (Part No. 81102)

Mobile Phase: Water:Acetonitrile (55:45)

Flow Rate: 5.0mL/min

Column Temp.:

25°C

GRACE
ELSD对流动相的组成改变不响应,允许在极端梯度条件下的快速分离

1. Ephedrine 2. Acetylsalicylic acid 3. Diphenhydramine 4. Trimipramine

#10451

Column: Mobile Phase: Gradient:
Flow Rate: Column Temp:

Alltech? Alltima? HP C18, 3?m, 33 x 7.0mm (Part No. 87671) A: 0.1% TFA in Water B: 0.1% TFA in Acetonitrile Time: 0 3 %B: 10 90 2.5mL/min 30°C

主要的应用领域

GRACE

Pharmaceuticals 药物
Non-chromophoric drugs 没有发光团的 药品
Excipients 赋性剂 Impurities 杂质 Amino acids氨基酸 Aminoglycoside antibiotics 氨基糖甙类

Polymers/Surfactants聚合 物/表面活性剂

PEGs 酯

Polysorbate聚山梨酸

Tween PVA聚乙烯醇

GPEC

Dimethicone

Nutraceuticals 天然产物
Ginseng 人参 Astragaloside IV 黄芪甲苷 Ginkgolides 银杏 Glucosamine氨基葡萄糖
Lipids 脂类
Phospholipids磷脂 Triglycerides 甘油三酸酯 Fatty acids 脂肪酸
Carbohydrates碳水化合物
Simple sugars单糖 Oligomers 寡糖 Sugar alcohols糖醇

2005版中国药典中用ELSD检测的药品名称

序号 产品名称

1

地肤子

检测化合物 地肤子皂苷

色谱条件 甲醇-水-冰醋酸=85:15:0.2

2

路路通

路路通酸

甲醇-水-冰醋酸=87:13:0.1

3

黄芪

黄芪甲苷

C18柱,乙腈:水=32:68

4

炙黄芪

黄芪甲苷

C18柱,乙腈:水=32:68

5

银杏叶

萜类内酯 白果内酯 C18柱,甲醇:四氢呋喃:水=25:10:65

6

银杏叶提取物 萜类内酯 白果内酯 C18柱, 正丙醇:四氢呋喃:水=1:15:84

7

知母

拔契皂苷元

C18柱,甲醇:水=95:5

8

意苡仁

甘油三油酸酯

C18柱,乙腈:二氯甲烷=65:35

9

浙贝母

贝母素

C18柱,乙腈:水:二乙胺=70:30:0.3

10 乙肝宁颗粒 黄芪甲苷

甲醇-水=75:25

11 玉屏风口服液 黄芪甲苷

乙腈-水=35:65

12 补中益气丸 黄芪甲苷 (水丸)

C18柱,乙腈:水=35:65

13 银杏叶片

萜类内酯 白果内酯 C18柱, 正丙醇:四氢呋喃:水=1:15:84

GRACE
药典页码 一部P81 一部P205 一部P212 一部P213 一部P220 一部P282 一部P1 48 一部P260 一部P205 一部P290 一部P409 一部P480
一部P597

2005版中国药典中用ELSD检测的药品名称

GRACE

序号 产品名称

检测化合物

13 硫酸卡那霉素 卡那霉素

色谱条件 C18柱,0.2mol/L三氟乙酸溶液:甲醇=95:5

14 硫酸庆大霉素 庆大霉素 小诺霉素 C18柱,0.2mol/L三氟乙酸溶液:甲醇=92:8

15 硫酸依替米星 依替米星 奈替米星 C18柱,0.2mol/L三氟乙酸溶液:甲醇=84:16

16 硫酸小诺霉素 小诺霉素/庆大霉素 C18柱,0.2mol/L三氟乙酸溶液:甲醇=94:6 C1a

药典页码 二部P724 二部P730 二部P740 二部P718

ELSD对氨基葡萄糖有比RI和UV更好的响应

GRACE

1. Glucosamine (1mg/mL)

# 10412 # 10413 # 10411

Column: Prevail? Carbohydrate ES, 5?m, 150 x 4.6mm (Part No. 35102) Mobile Phase: Acetonitrile:Water (65:35) Flow Rate: 1.0mL/min

GRACE
使用ELSD可以梯度洗脱完全分离多种磷脂,灵敏度高

1. Cholesterol 2. Palmitic acid 3. Phosphatidylethanolamine 4. Phosphatidylserine 5. Phosphatidylcholine 6. Sphingomyelin

胆固醇 棕榈酸 磷脂酰乙醇胺 磷脂酰丝氨酸 卵磷脂 神经鞘磷脂

Column: Mobile Phase: Gradient:
Flow Rate:

Alltech? Allsphere? Silica, 3?m, 100 x 4.6mm (Part No. 778382) A: IPA B: Hexane C: Water Time: 0 7 15 %B: 40 40 40 %C: 2 8 8 1.25mL/min

ELSD检测糖醇-高灵敏度和稳定的基线

糖醇

1. iso-Erythritol异赤藻糖醇 2. Xylitol 木糖醇 3. Mannitol甘露醇 4. Maltitol麦芽糖醇

GRACE
# 9352

Column: Mobile Phase: Flow Rate:

Prevail? Carbohydrate ES, 5?m, 250 x 4.6mm (Part No. 35101) Acetonitrile:Water (70:30) 1.0mL/min

ELSD轻松检测困难化合物--Tween 80
5% Tween 80

GRACE

Column: Mobile Phase: Flow Rate:

Alltech? Alltima? C18, 5?m, 250 x 4.6mm (Part No. 88056) Water:Methanol (60:40) 1.0mL/min

ELSD梯度洗脱分离玉米糖浆低聚糖

GRACE

1. Dextrose 2. Maltose 3. Maltotriose 4. Maltotetraose 5. Maltopentaose 6. Maltohexaose 7. Maltoheptaose 8. Maltooctaose 9. Maltononaose 10. Maltodecaose 11. Maltoundecaose 12. Maltododecaose 13. Maltotridecaose 14. Maltotetradecaose 15. Maltopentadecaose

Column: Mobile Phase: Gradient:
Flow Rate:

Alltech? Prevail? Carbohydrates ES 300A, 5?m, 250 x 4.6mm (Part No. 35101) A: Acetonitrile B: Water Time: 0 15 %B: 35 50 1.0mL/min

无需衍生检测橄榄油中的甘油三酯

GRACE

脂肪和油一般含有特征性的甘油三酯,分 析甘油三酯可以鉴定脂肪和油的品种.
1. 1,2-Dilinoleyl-3-Oleyl-rac-glycerol (LLO) 2. 1,2-Dilinoleyl-3-Palmityl-rac-glycerol (LLP) 3. 1,2-Dioleyl-3-linolein-rac-glycerol (OOL) 4. 1-Palmityl-2-Olein-3-linolein-rac-glycerol (POL) 5. 1,2-Dipalmityl-3-linolein-rac-glycerol (PPL) 6. Triolein (OOO) 7. 1,2-Dioleyl-3-palmityl-rac-glycerol (OOP) 8. 1,2-Dipalmityl-3-oleyl-rac-glycerol (PPO) 9. 1,2-Dioleyl-3-stearyl-rac-glycerol (OOS)

Column: Mobile Phase: Gradient:
Flow Rate:

Alltech? Alltima? C18, 3?m, 150 x 4.6mm (Part No. 91387) A: Dichloromethane B: Acetonitrile Time: 0 10 18 20 %B: 70 55 70 70 1.5mL/min

掺有植物油的橄榄油的鉴定分析

GRACE

1. LLL 2. LLO 3. LLP 4. OOL 5. POL 6. OOO 7. OOP 8. PPO 9. OOS

Column: Mobile Phase:
Gradient:
Flowrate: Detector:

Alltima? C18, 3?m, 150 x 4.6mm A: Dichloromethane B: Acetonitrile Time: 0 10 18 20 %B: 70 55 70 70 1.5mL/min ELSD 2000

橄榄油含有大量的油酸甘油三酯,而不含亚麻酸甘油三酯.后者却存在 于菜油中,显示于掺有菜油的橄榄油谱图中.

GRACE
生物柴油(Biodiesel Poster)生产中的反应和质量 监控
?生物柴油是一种可再生、生物可降解和无毒燃料,它可 以通过动植物油的转酯反应来制备.作为天然柴油的替代 物.
?目前国内外学者广泛采用的转酯法,即三甘油酯在酸、 碱或酶等催化剂作用下经转酯反应制备生物柴油
?MAGs, DAGs和未反应的TAGs会造成污染影响生物柴油的 品质

GRACE
Biodiesel Contaminated with Mono-, Di- and Triacylglycerols
Unreacted Tryacylglycerols (豆油Soy Oil)

80

800

60

mV

600

40

mV

20

400

200

0

23.0

24.0

25.0

26.0

27.0

Time (min)

28.0

29.0

30.0

1-L 1-O 1-S 1,3-LL

0

10

20

30

Time (min)

Column: Alltima? HP C18-HL, 5?m, 250 X 4.6mm Gradient: Time 0

Mobile Phase: A: Acetonitrile

B: Dichloromethane

%B 0

5 30 32 35 15 70 70 0

Flow rate: 1.0 ml/min

氨基糖苷类抗生素的ELSD分析(中国药典2005) GRACE

庆大霉素 C组分
1. Sulfate 2. Gentamicin C1a 3. Gentamicin C2 4. Gentamicin C2b 5. Gentamicin C2a 6. Gentamicin C1

# 10425

*中检所抗生素室

Column: Apollo C18, 5?m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: 0.2M Trifluoroacetic Acid:Methanol (94:6) Flow Rate: 0.6mL/min

银杏叶提出物中内酯含量的ELSD测定(中国药典2005)

GRACE

银杏叶提出物的内酯类成份决定了其药理作用,HPLC-RI法灵敏度与 稳定性均不理想;若采用紫外分析因为内酯类成份吸收差,最大吸收 波长在219nm,受试剂末端吸收影响很大。

mVolts
1 2 3 4 mVolts

3300-B
Pk #

300

300

250

250

200

200

150

150

100

100

50

50

0

0

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

Minutes

1. 银杏苦内酯C 2. 白果内酯 3. 银杏苦内酯A 4. 银杏苦内酯B

Column: Platinum C18, 5?m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: H2O:MeOH:THF=75:20:10 Flow Rate: 1.0mL/min

黄芪中黄芪甲苷的ELSD分析(CHP2005)

GRACE

黄芪甲苷常作为指标性成份用于黄芪药材的质量监控,因为只在 220nm有弱的末端吸收,过去未能使用HPLC法定量,ELSD有通用响 应,使用HPLC-ELSD法干扰少,分离度高.

mVolts
1 mVolts

700

3300
Pk #

700

1. 黄芪甲苷

600

600

500

500

400

400

300

300

200

200

100

100

0

0

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

Minutes

Column: Apollo C18, 5?m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: CAN:H2O= (32:68) Flow Rate: 1.0mL/min

三七药材及其制剂中 三七皂苷R1,人参皂苷Rg1及Rb1的含量

GRACE

图 三七药材及血塞通注射液HPLC色谱图 a.对照品b.三七药材c.血塞通注射液
1.三七皂苷R1 2.人参皂苷Rg13. 人参皂苷Rb1

Column: Mobile Phase: Gradient:
Flow Rate:

Alltech? Alltima? C18, 5?m, 150 x 4.6mm A: Water B: Acetonitrile Time: 0 21 %B: 30 60 0.6 mL/min

Alltech ELSD 2000ES

GRACE

光路和电子元件进行更新
?布儒斯特角光阱,增加光阱尾吹 ?30mW的激光光源 ?光池涂四氟乙烯的抗腐蚀涂层
降低背景噪音,比2000ELSD提高一个数量级的灵敏度

关于布儒斯特角

GRACE

?当反射光线和折射光线的传播方向互相垂直时,入射光线的偏振角 称为布儒斯特角.
?当透镜只能通过垂直方向的偏振光时,便可挡住部分散射的光线.
?自然光在两种各向同性媒质分界面上反射、折射时,反射光和折 射光都是部分偏振光。反射光中垂直振动多于*行振动,折射光中 *行振动多于垂直振动。

ELSD 2000ES性能更新
灵敏度的挑战

GRACE

?一种措施是仅仅增加光强,但是同时会增加基 线的噪音,导致LOD和信噪比没有变化。

?ELSD 2000ES 克服这种*ɡ杓频牟既 斯特角光阱,当光强增加时,信号的增强远大于 噪音的增加。2000ES结合布儒斯特角光阱和30mW 的光源为一体。

ELSD 2000ES灵敏度更新

GRACE

?对相同的浓度的样品有多于10倍的信噪比 (S/N)增长
?增强最小检出限 (LOD)

灵敏度比较 – 2000ES vs 2000

GRACE

2000ES对相同量的氢化可的松增加灵敏度
1. Hydrocortisone (100ng on column)

Column: Alltima? C18, 5?m, 4.6 x 250mm Phase: Water:Acetonitrile (55:45) Flow Rate: 1.0mL/min

(Part No. 88056)Mobile

灵敏度比较表 – 与其它品牌的ELSD

GRACE

?Alltech 2000(ES)ELSD具有专利保护的分流不分流 双模式, 用户可根据应用自行选择操作模式;
?其它品牌的ELSD均为单一的强制分流模式;

Alltech Model 3300 ELSD

GRACE

基于Windows的LCD 屏幕上显示谱图 包括中文在内的7种语言选择

方法向导一步步地输入分析条件后自动设定仪器参数 出错和服务记录 直接连接Aglient 1200 ChemStation工作站无需A/D转换

前面板的设计方 便了喷雾头和漂 移管的清洗 和 维护
液体入口

废液出口

高灵敏度:
相当于2000ES的灵敏度, 高于其它品牌

Technical Overview
Next Generation ELSD
Technical Status - Mechanical
Nebulizer: Modified to incorporate quick connect gas inlet and for easy removal/installation without any tools
Impactor: Mounted on a removable cartridge insert. By removing the nebulizer and the cartridge, the drift tube can be cleaned from the front through an access door.

Technical Overview
Next Generation ELSD
Technical Status – Mechanical (Cont.)
Exhaust/Liquid Waste Line: Redesigned for a cleaner look. The condensed exhaust vapor is combined with the liquid waste through internal tubing. The exhaust vapor is vented to the back of the unit. This eliminates the need for a condensation flask.
Drift Tube: 0.07" copper sleeved stainless steel for improved temperature stability.

ELSD清洗
?需要对流路进行清洗 - Drift tube漂移管 - Nebulizer雾化器 - Optics windows光池 - Light trap光阱
?多长时间 - 根据样品,方法和使用频率而定 - 通常每半年一次

GRACE

Qualification 认证

GRACE

? Installation Qualification (IQ) 安装认证
- Site requirements 场地要求 - Unpacking and inspection 拆箱及检查 - Instrument setup 仪器安装
? Operational Qualification (OQ) 操作认证
- Gas flow test 气流测试 - Drift tube temperature test 漂移管温度测试 - Background scatter or laser power test 背景散射光或激光功率测试
? Performance Qualification (PQ) 性能认证
- Drift and noise evaluation 漂移和噪音的评估 - Reproducibility 重复性 - Sensitivity 灵敏度
--推荐每年进行一次 --在ELSD2000ES包装中随机带有认证文件

总结:ELSD用于分析的优势

GRACE

?通用性 - 分析样品中几乎所有的峰都能检测到 - 改进定量方法 - 更精确的评估峰纯度
? 灵敏度 - 检出限达到ng级 (2000ES更优)
? 梯度兼容性 - 在坡度梯度中保持稳定的基线


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